Produkter
Lifecosm SARS-Cov-2-RT-PCR-deteksjonssett for 2019-nCoV
Forventet bruk
Dette settet brukes til kvalitativ påvisning av nytt koronavirus (2019-nCoV) ved bruk av svelgprøver, nasofaryngeale vattpinner, bronkoalveolær skyllevæske, sputum. Påvisningsresultatet for dette produktet er kun for klinisk referanse, og det skal ikke brukes som det eneste bevis for klinisk diagnose og behandling.En omfattende analyse av tilstanden anbefales i kombinasjon med pasientens kliniske manifestasjoner og andre laboratorietester.
Inspeksjonsprinsipp
Settet er basert på ett-trinns RT-PCR-teknologi.Faktisk ble det nye koronaviruset (2019-nCoV) ORF1ab og N-genene fra 2019 valgt som målregionene for amplifikasjon.Spesifikke primere og fluorescerende prober (N-genprober er merket med FAM og ORF1ab-prober er merket med HEX) er designet for å oppdage 2019 ny type coronavirus RNA i prøver.Settet inkluderer også et endogent internkontrolldeteksjonssystem (intern kontrollgenprobe merket med CY5) for å overvåke prosessen med prøvetaking, RNA- og PCR-amplifisering, og dermed redusere falske negative resultater.
Hovedkomponenter
| Komponenter | Volum(48T/sett） |
| RT-PCR reaksjonsløsning | 96 ul |
| nCOV primer TaqMan probeblanding (ORF1ab, N-gen, RNAseP-gen) | 864 ul |
| Negativ kontroll | 1500 ul |
| nCOV positiv kontroll（l ORF1ab N-gen） | 1500 ul |
Egne reagenser: RNA-ekstraksjons- eller rensereagenser.Negativ/positiv kontroll: Den positive kontrollen er RNA som inneholder målfragmentet, mens den negative kontrollen er nukleinsyrefritt vann.Under bruk bør de delta i utvinningen og bør anses som smittsomme.De skal håndteres og avhendes i henhold til relevante forskrifter.
Det interne referansegenet er det humane RNAseP-genet.
Oppbevaringsbetingelser og utløpsdato
-20±5 ℃, unngå gjentatt frysing og tining mer enn 5 ganger, gyldig i 6 måneder.
Gjeldende instrument
Med FAM / HEX / CY5 og annet flerkanals fluorescerende PCR-instrument.
Prøvekrav
1. Gjeldende prøvetyper: halsprøver, nasofaryngeale vattpinner, bronkoalveolær skyllevæske, sputum.
2. Prøveinnsamling (aseptisk teknikk)
Svelgpinne: Tørk av mandlene og bakre svelgvegg med to vattpinner samtidig, dypp deretter vattpinnehodet i et reagensrør som inneholder prøveløsningen
Sputum: Etter at pasienten har en dyp hoste, samle det hostede sputumet i et reagensglas med skrukork som inneholder prøveløsningen;bronkoalveolær skyllevæske: Prøvetaking av medisinske fagfolk.3. Lagring og transport av prøver
Prøver for virusisolering og RNA-testing bør testes så snart som mulig.Prøver som kan oppdages innen 24 timer kan lagres ved 4 ℃;de som ikke kan oppdages innen 24
timer skal lagres ved -70 ℃ eller lavere (hvis det ikke er noen lagringsforhold på -70 ℃, bør de være
midlertidig lagret ved -20℃kjøleskap).Prøver bør unngå gjentatt frysing og tining under transport.Prøver skal sendes til laboratoriet så snart som mulig etter innsamling.Dersom prøver må transporteres over lange avstander, anbefales tørrislagring.
Testmetoder
1 Prøvebehandling og RNA-ekstraksjon (prøvebehandlingsområde)
Det anbefales å ta 200μl væskeprøve for RNA-ekstraksjon.For relaterte ekstraksjonstrinn, se instruksjonene til kommersielle RNA-ekstraksjonssett.Både det negative og det negative
kontroller i dette settet var involvert i ekstraksjonen.
2 PCR-reagensforberedelse (reagensforberedelsesområde)
2.1 Fjern alle komponentene fra settet og tin og bland ved romtemperatur.Sentrifuger ved 8000 rpm i noen sekunder før bruk;beregne den nødvendige mengden reagenser, og reaksjonssystemet er forberedt som vist i følgende tabell:
| Komponenter | N-servering (25 µl system) |
| nCOV primer TaqMan probeblanding | 18 ul × N |
| RT-PCR reaksjonsløsning | 2 µl × N |
| *N = antall testede prøver + 1 (negativ kontroll) + 1 (nCOVpositiv kontroll) | |
2.2 Etter å ha blandet komponentene grundig, sentrifuger en kort stund for å la all væsken på rørveggen falle til bunnen av røret, og alikvoter deretter 20 µl amplifikasjonssystemet inn i PCR-røret.
3 Prøvetaking (prøveforberedelsesområde)
Tilsett 5μl av de negative og positive kontrollene etter ekstraksjon.RNA fra prøven som skal testes tilsettes PCR-reaksjonsrøret.
Lukk røret godt og sentrifuger ved 8000 rpm i noen sekunder før det overføres til amplifikasjonsdeteksjonsområdet.
4 PCR-amplifikasjon (amplifisert deteksjonsområde)
4.1 Plasser reaksjonsrøret i prøvecellen til instrumentet, og still inn parametrene som følger:
| scene | Syklus Antall | Temperatur(°C) | Tid | samlingnettstedet |
| Omvendttranskripsjon | 1 | 42 | 10 min | - |
| Pre-denatureringn | 1 | 95 | 1 minutt | - |
| Syklus | 45 | 95 | 15s | - |
| 60 | 30-årene | datainnsamling |
Instrumentdeteksjonskanalvalg: Velg FAM、HEX、CY5-kanalen for fluorescenssignalet.For referanse fluorescerende INGEN, vennligst ikke velg ROX.
5 Resultatanalyse (Vennligst se de eksperimentelle instruksjonene for hvert instrument for innstilling)
Lagre resultatene etter reaksjonen.Etter analyse, juster startverdien, sluttverdien og terskelverdien til grunnlinjen i henhold til bildet (brukeren kan justere i henhold til den faktiske situasjonen, startverdien kan settes til 3~15, sluttverdien kan settes til 5~20, justering) i den logaritmiske grafen Ved terskelen til vinduet er terskellinjen i logaritmisk fase, og forsterkningskurven til den negative kontrollen er en rett linje eller under terskellinjen).
6 Kvautkontroll（En prosedyrekontroll er inkludert i testen） Negativ kontroll: Ingen åpenbar amplifikasjonskurve for FAM, HEX, CY5 deteksjonskanalern
COV positiv kontroll: åpenbar amplifikasjonskurve for FAM- og HEX-deteksjonskanaler, Ct-verdi ≤32, men ingen amplifikasjonskurve for CY5-kanal;
Kravene ovenfor må oppfylles samtidig i samme forsøk;ellers er eksperimentet ugyldig og må gjentas.
7 Fastsettelse av resultater.
7.1 Hvis det ikke er noen amplifikasjonskurve eller Ct-verdi > 40 i FAM- og HEX-kanalene til testprøven, og det er en amplifikasjonskurve i CY5-kanalen, kan det bedømmes at det ikke er noe nytt koronavirus fra 2019 (2019-nCoV) RNA i prøven;
.2 Hvis testprøven har tydelige amplifikasjonskurver i FAM- og HEX-kanalene, og Ct-verdien er ≤40, kan det bedømmes at prøven er positiv for det nye koronaviruset fra 2019 (2019-nCoV).
7.3 Hvis testprøven har en klar amplifikasjonskurve bare i én kanal av FAM eller HEX, og Ct-verdien er ≤40, og det ikke er noen amplifikasjonskurve i den andre kanalen, må resultatene testes på nytt.Hvis retestresultatene er konsistente, kan prøven bedømmes til å være positiv for den nye
koronavirus 2019 (2019-nCoV).Hvis retestresultatet er negativt, kan det bedømmes at prøven er negativ for 2019 nytt koronavirus (2019-nCoV).
Positiv vurderingsverdi
ROC-kurvemetoden brukes til å bestemme referanse-CT-verdien til settet og internkontrollreferanseverdien er 40.
Tolking av testresultater
1. Hvert eksperiment bør testes for negative og positive kontroller.Testresultater kan kun bestemmes når kontroller oppfyller kvalitetskontrollkrav
2.Når FAM- og HEX-deteksjonskanalene er positive, kan resultatet fra CY5-kanalen (intern kontrollkanal) være negativt på grunn av systemkonkurranse.
3.Når internkontrollresultatet er negativt, hvis reagensrørets FAM- og HEX-deteksjonskanaler også er negative, betyr det at systemet er deaktivert eller at operasjonen er feil, t er testen ugyldig.Derfor må prøvene testes på nytt.
